阳光的天外飞天的回答：
方法一： 细菌转化的方法多以mendel和higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的cacl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。 用cacl2製备新鲜或冷冻的大肠桿菌感受态细胞，常用于成批製备感受态细菌。
️感受态细胞的製备和转化中 为什么要加两次cacl2？cacl2为什么要预冷
就喜欢理财的回答：
方法一： 细菌转化的方法多以mendel和higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的cacl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。 用cacl2製备新鲜或冷冻的大肠桿菌感受态细胞，常用于成批製备感受态细菌。
️为什么扩大培养质粒要转到感受态细胞内而不可以直接用pcr扩增？
热心网友的回答：
你要扩大的是质粒不是pcr片段，直接pcr哪能扩那么大的质粒啊，而且质粒还是环形的，怎么做pcr，所以当然是摇菌啦
苹果是最好的的回答：
质粒是环状dna分子是一个有生命活力的个体，如果需要大量的扩增，就必须用生物扩增法，就像一个生命体在不断繁殖一样，藉助感受态细胞繁殖就会越来越多。pcr属于一种机械扩增，是机械性的将一个一个个体拼接起来，就像咱们化学合成一样，而且他扩增的只是一个dn**段。再者，dna本来就是生命体内的东西，那肯定是，在生物体内繁育扩增，才是最有效快捷的方法。
热心网友的回答：
主要是效率问题， 通过菌体繁殖而进行的扩增是pcr的若干倍。
️常用感受态细胞製备方法有哪些？
小灰马的回答：
方法一：
细菌转化的方法多以mendel和higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用
冰预冷的cacl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。
用cacl2製备新鲜或冷冻的大肠桿菌感受态细胞，常用于成批製备感受态细菌。本法适用于大多数大肠桿菌菌株，且迅速、重複性好。操作过程简述如下。
1．从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠桿菌dh52），或1ml新鲜的16～20h过夜培养物，转到一个含有100mllb培养基的1l或500ml烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养约2～3h（旋转摇床200～300r/min），每隔20～30min测量od600值≈0.4。
2．在无菌条件下将细菌转移到一个，用冰预冷的50ml聚丙烯离心管中，在冰上放置10～20min。
3．于4℃用sorvallgs2转头（或与其离心管相配的转头）以4000r/min离心10min，以**细胞。
4．倒数培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。 5．以10ml用冰预冷的0.1mmcacl2重悬每份沉澱，放于冰上。
6．于4℃用sorvallgs3转头（或与其相应的转头）以4000r/min离心10min，以**细胞。
7．倒出培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。
8．每50ml初始培养物用2ml冰预冷的0.1m cacl2重悬每份沉定，此时，可以迅速将细胞分装成小份，液氮中冰冻，-70℃贮存备用。
9．用冷却的无菌吸头从每种感受态细胞悬液中各取200μl转移到无菌的微量离心管中，每管加dna或连线反应混合物（体积≤10μl，dna≤50ng），轻轻旋转以混匀内容物，在冰中放置30min。
10．将离心管放到预加温到40℃的迴圈水浴中的试管架上，放置90s～2min，不要摇动试管。
11．快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1～2min。 12．每离心管加800μlsoc培养基，用水浴将培养基加温到37℃，然后将管转移到37℃摇床上，温育45min使细菌复甦，并且表达质粒编码的抗生素抗性标记基因。 13．将适当体积（每个90mm平板可达200μl）已转化的感受态细胞转移到含200mmol/l mgso4和相应抗生素的sob培养基上。
14．将平板置于室温至液体被吸收。
15．倒置平皿，于37℃培养，12～16h后可出现菌落。
方法二：
cassuper one-step ***petent cell preps kit 採用一种简单便捷的方法处理大肠桿菌，使其成为感受态细胞，便于质粒dna的转化，可满足一般实验的要求。与cacl2法相比具有多种优点：使用方便，只需一步即可完成感受态细胞的製备；转化效率略高于cacl2法，一般可达106-108cfu/μg，满足一般实验需要；感受态细胞製成后即可储存于-70℃,无须加入甘油，并且经长期储存活力无明显下降。
準备工作：
1． 从液氮或低温冰箱中取出的大肠桿菌冻存菌，在lb平板上划线，37度过夜至长 出单菌落。挑形态饱满的单菌落2个，分别接种5ml lb培养基中，37℃，250rpm， 过夜培养。
2． 次日从5ml lb培养物吸取200μl转入50ml lb培养基中（250ml 锥形瓶），37 ℃，250rpm培养2小时，此时od600约0.4—0.5。
感受态细胞的製备：
3． 吸取1ml菌液到1.5ml离心管里，5000rpm离心5分钟，弃去上清。 4． 加入100μl预冷的solution a，悬浮菌体，冰浴30分钟。
5． 此时感受态细胞已经制成可立即使用或-70℃储存。 细胞转化：
6． 在感受态细胞中加入100pg-10ngdna，混匀，冰浴30分钟，然后42℃ 1分钟热 击，再次冰浴2 分钟。加入0.9ml lb 培养基，20μl solution b，37℃，振荡 培养1小时。
7． 取适当菌液（100-200μl）涂布相应抗性的平板。 8． 过夜培养约16个小时，数菌落数，计算转化率。 补充说明：
1． 所用器具一定要清洁；
2． 操作步骤2 中培养基的装量也是很重要的，建议装量不要高于此值：500ml 锥形 瓶装100ml培养基，250ml锥形瓶装50ml培养基；
3． 在收穫菌体前半小时还可以在培养基中加入20mm的mgcl2 ，效果会更好一些； 4． 为保证细胞处于对数生长期，培养后的菌体的od值不要高于0.6； 5． 製备感受态细胞时所有操作儘量保证在冰上操作；
6． 细胞转化操作步骤6中也可以不必进行热击，冰浴后直接加入新鲜lb，简化操作 步骤，但转化效率低于热击方法，适用于对转化率要求不高的实验。
方法三：
1、取1%大肠桿菌e.coli接种于含2ml lb培养基的试管中，37℃振荡培养过夜 2、取0.1ml过夜培养物转种于含10ml lb培养基的三角瓶中，37℃振荡培养3h至od600=0.
3ml离心管中，冰浴10min。 4、在4℃下以4000rpm离心5min，去上清液
5、把菌体悬浮于15m1冰冷的0.1m cacl2溶液中，置冰上30min 6、然后再在4℃下以4000rpm离心10min，去上清液
7、将菌体悬浮于0.1ml cacl2溶液中，冰浴放置4-12hr备用。
方法四：
（1）将1ml过夜培养的细菌（如dh52、tg1、tm101）接种于100ml2×yt培养于500ml
烧瓶。于37℃刷烈振荡，通常≥200rpm培养的细菌密度约od550=0.2～0.5(5×107
cells/ml),需2～4h。
（2）将培养物放于冰上致冷10min，于4℃离心细菌培养物，10000rpm离心10min。 （3）弃除上清，将细菌悬浮于原始培养体积的一半（约50ml）的50mmcacl2和10mm tris·hcl（ph8.0）无菌冷冻液体中。
（4）将细菌悬浮放在冰上约5min，然后将悬浮物于4℃10000/rpm离心10min。
（5）弃上清，悬浮细菌于原始培养体积的1/15的50mmcacl和10mmtris·hcl（ph8.0）无菌冷冻中。此时的细胞是感受态细胞，即可用于转化。
200μl分装于无菌的1.5ml微量离心管中，贮存于-80℃冰箱中。
方法五：
tsb法（也是本人热衷的方法） 1.药品製备
1m mg2+
(1m mgso4 和 1m mgcl2等体积混合)，用0.22um滤膜超滤除菌。 tsb液（30ml/ 80ml菌液）（现配现用）：
peg3350 3g tryptone 0.3g yeast extract 0.15g nacl 0.
3g 2. 步骤： （1）活化菌株
（2）挑单菌落培养于5ml 的液笨培养基中
（3）取液体培养物50ul于80ml的液体培养基中进行扩大培养
（4）370
c培养3－4小时，od600在0.4－0.6 （5）离心，去上清
（6）加入20mltsb，重悬 （7）离心，去上清
（8）加入10mltsb，再加入15－20%的甘油，分装储存 注，整个操作过程均应在冰上进行。所用药品均需灭菌。
转化程式 （1）取出200μl感受态细胞慢慢使其溶化，并立即放于冰上，加入dna或连线反应混合物，dna量通常≤50mg。用手指弹打试管10次，使之混匀，然后放在冰上40～45min。 （2）将管放于42℃水浴中2min。
（3）然后每管直接加入1.0ml2×yt培养基，倒置混匀，并于37℃培养8～12h，干浴或水浴，不需振摇。此期间使细菌生长并开始表达抗菌素。
（4）每200μl转化混合物分别于6个2×yt琼脂培养板上补充相应抗生素，并含有x-gal（20mg/ml）、iptg（200mg/ml）。
热心网友的回答：
最常用的：cacl2法。
有钱的话直接买。
苏素的回答：
电击法,钙离子处理法
冰浴过程中，原来加在溶液中的钙离子和细菌细胞膜结合，在低温下形成液晶结构，这样，在42度热激下，这种液晶结构收缩，将细胞膜扯开孔道，使dna进入细菌细胞中。这就是原理。在0 4 cacl2低渗溶液中，细胞膨胀成球状，转化混合物中的dna形成抗dna酶的羟基 钙磷酸複合物黏附于细胞表面，较低的温度也降...
感受态细菌放在 80，一般可以放一年左右。一般认为在刚做好的头40天转化效率最高。感受态只能冻融一次，融化后在冰上，半小时以内使用，一小时也可以，但是效率会随着时间延长而下降。处于感受态的细菌细胞有何优点 感受态的细胞处于最适摄取和容纳外来dna的生理状态。再者，将构建好的载体转入感受态细胞进行表达...
停止细菌增殖 加入金属离子后，细胞膜低温容易形成液晶态，转化效率高。感受态细胞的製备时有什么注意事项 1 培养温度。较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了 inoue 的高效感受态製备方法，它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一 个非常理想方法...
