上海富衡 | 如何配置细胞完全培养基

细胞完全培养基是维持细胞在体外生存和生长的关键，它模拟了细胞在体内的环境，提供细胞所需的各种营养物质、生长因子等。以下为你详细介绍配制细胞完全培养基的一般步骤和注意事项：

• ️选择合适的基础培养基：常见的基础培养基有 DMEM（杜氏改良伊格尔培养基）、RPMI - 1640、MEM（伊格尔基本培养基）等，不同类型的细胞对基础培养基的需求不同。例如，大多数贴壁生长的细胞如成纤维细胞常用 DMEM 培养基；而悬浮生长的淋巴细胞等则常用 RPMI - 1640 培养基。需根据所培养细胞的种类和特性选择合适的基础培养基。
• ️购买或配制基础培养基干粉：可以直接购买商品化的基础培养基干粉，按照产品说明书进行操作。一般是将干粉溶解于适量的三蒸水或去离子水中，充分搅拌溶解，有些培养基可能还需要加入适量的碳酸氢钠以调节 pH 值，并补充一些特定的成分。若自行配制，需准确称取各种成分，如氨基酸、维生素、无机盐等，按照配方依次溶解并混合均匀。溶解过程中可能需要适当加热和搅拌以促进溶解，但要注意温度不宜过高，避免成分被破坏。

• ️选择血清类型：血清是细胞完全培养基中重要的成分，能提供细胞生长所需的生长因子、激素、贴壁和铺展因子等。常见的血清有胎牛血清（FBS）、小牛血清、马血清等，其中胎牛血清因其含有丰富的营养成分且抗体含量低，对细胞生长的支持作用较好，应用最为广泛。
• ️确定血清添加比例：不同细胞对血清浓度要求不同，一般添加比例在 5% - 20% 之间。大多数细胞常用的血清浓度为 10%。例如，在配制 500 mL 完全培养基时，若使用 10% 的血清浓度，则需要加入 50 mL 的胎牛血清。
• ️血清的处理：血清在使用前通常需要进行灭活处理，以去除补体活性，避免补体对细胞产生毒性作用。一般将血清在 56℃水浴中加热 30 分钟进行灭活，加热过程中需不时轻轻摇晃，确保受热均匀。灭活后的血清应尽快使用，或分装后 -20℃保存，避免反复冻融。

• ️选择抗生素种类：为防止细胞培养过程中微生物污染，可在培养基中添加抗生素。常用的抗生素有青霉素、链霉素、庆大霉素等，它们分别对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌等有抑制作用。一般使用青霉素 - 链霉素混合液（双抗），其终浓度通常为青霉素 100 U/mL，链霉素 100 μg/mL。
• ️注意事项：虽然抗生素能有效防止污染，但长期使用可能会导致细胞产生耐药性或对细胞生长产生不良影响。因此，若细胞培养环境较为洁净，可不添加抗生素；如需添加，应尽量避免长期连续使用，或定期更换抗生素种类。

• ️使用 pH 调节剂：基础培养基溶解后，其 pH 值可能与细胞适宜生长的 pH 值（一般为 7.2 - 7.4）存在差异，需要使用酸碱调节剂进行调整。常用的酸为 1 N HCl，碱为 1 N NaOH。使用 pH 计或 pH 试纸监测 pH 值，缓慢滴加酸碱调节剂并搅拌均匀，直至达到合适的 pH 值范围。
• ️注意事项：pH 值对细胞生长影响较大，过高或过低的 pH 值都会抑制细胞生长甚至导致细胞死亡。在调整 pH 值时要小心操作，避免调节过度。同时，由于细胞培养过程中会产生代谢产物使培养基 pH 值发生变化，因此在培养过程中也需要定期监测 pH 值，必要时进行调整。

• ️选择合适的滤器：配制好的完全培养基需要进行过滤除菌，以去除其中可能存在的细菌、真菌等微生物。常用的滤器为 0.22 μm 或 0.45 μm 孔径的无菌过滤器，0.22 μm 孔径的滤器可有效去除细菌，0.45 μm 孔径的滤器除细菌外还能去除一些较大的真菌孢子等。根据培养基的体积选择合适规格的滤器，如 500 mL 以下的培养基可使用一次性注射器式滤器，较大体积的培养基可使用真空抽滤装置搭配相应规格的滤膜。
• ️过滤操作：将培养基缓慢倒入滤器中，利用重力或真空负压使培养基通过滤膜，流入无菌容器中。过滤过程要在超净工作台内进行，严格遵守无菌操作规范，防止培养基再次被污染。过滤后的培养基应尽快使用，如暂时不使用，应在 4℃保存，保存时间不宜过长，避免营养成分流失或微生物滋生。

• ️无菌检测：取少量过滤后的培养基接种到无菌的肉汤培养基或琼脂平板上，37℃培养 24 - 48 小时，观察是否有微生物生长，以检测培养基是否无菌。
• ️细胞生长测试：用配制好的完全培养基培养相应的细胞，观察细胞的生长状态，包括细胞的贴壁情况、增殖速度、形态变化等。若细胞生长正常，说明培养基质量良好；若细胞出现生长缓慢、形态异常或死亡等情况，则可能需要检查培养基的配制过程，找出问题所在并进行调整。

通过以上步骤，即可配制出适合特定细胞生长的完全培养基。在整个配制过程中，要严格遵守无菌操作规范，准确称量和添加各种成分，以确保培养基的质量和细胞培养的成功。